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发酵罐装入溶积60%的培养基（成分同种子培养基）后，将发酵罐放入灭菌釜内，在115℃下，灭菌20min。当灭菌完成后，温度降到60℃以下时，打开灭菌釜，确认发酵罐上所连接的管路完好后，将罐去除。安装pH及溶解氧等检测装置，注意各接线口不要出现差错。由于操作过程要和水打交道，故线路连接一定要注意安全，要特别注意防止漏电。发酵罐灭菌排气管为玻璃管，内装有棉花，以保证蒸汽能自由出入发酵罐，同时不会出现染菌现象。取样口上连接一段硅胶管，在硅胶管上安装节流夹，以防止培养基在灭菌是流出。

1.尽快将通气管接好，确认排气口正常后，以0.3-0.5L/min通入空气。接通冷却水管路，开搅拌在低速下进行培养基的冷却。取样与分析方法 自培养操作开始起，每3h取一次样。取样时，将取样管口流出的最初15ml左右培养液作为废液，取随后流出的培养液10ml，在OD505下测定吸光度。所得数值基于已制得的菌体量与吸光度之间的曲线，换算出菌体浓度。

2.发酵菌的空消技术发酵罐的清洗 打开罐底排污阀，用冷水冲洗罐壁，如壁内壁有沉积物，操作人员必须下罐进行人工铲除，否则易包藏杂菌成为污染源。进罐清洗必须两人进行，一人进罐清洗，一人在外监护。同时与罐体相连的取样管道，进料管道，排污管道及有关阀门都要通水冲洗干净，最好通以沸水，以提高洗涤效率，洗完后盖上入孔盖。发酵罐空消操作打开罐顶各排汽阀，开三路进汽（罐底、风管、取样管）。开始时，蒸汽以下进上出为主，蒸汽由罐底和风管进入，由罐顶所有排汽阀排出冷空气。

3.在蒸汽排出时，即关闭各阀门，稍开排汽阀，当罐压上升到时，开罐顶各排汽阀，排汽历时 15-20min，蒸汽改为上进下出为主，即关闭底部蒸汽阀，关小进风管汽阀，蒸汽主要从取样管进，连消进料管进入，空消过程中蒸汽应将两只大罐间倒种管道、压料进风管道、接种管道以及各排汽阀打开，排汽消毒（两个冲视镜阀开启短暂时间即可）。

4.保压时间到，关蒸汽阀，排汽到罐压为0kgf/cm2待进料。分过滤器灭菌 开启使用时，用从空气压站出来的常温空气对分过滤器吹风24h左右，检查无菌，即可使用。以后如果不使用，也必须保持分过滤器通常温空气，以免染菌。酵罐的实消技术进料? 空消完毕，开始进料，进料约2/3体积时，开搅拌。由于加热时物料糊化膨胀，故先不定容。当温度达到70℃时定容。

5.液化底路直接进蒸汽加热至75℃左右，关蒸汽，加入用50℃水调匀的α-淀粉酶，严防酶结块，根据生产需要，调整加入量，从进风管通入少量空气，翻腾10-15min，关闭进气。实消 用水冲洗入孔盖，盖好盖子进行实消，先将蒸汽管道内的残存水放完，然后通三路蒸汽，一路罐底，一路进风管，一路取样管，同时打开罐顶所有排汽阀门，小旋塞及压力表下的排汽旋塞，让蒸汽排出，先大后小，待罐压上升到温度121℃时，逐步关小各排汽阀门，保温保压25-30min。 保压时间到，关蒸汽，此时应即从分过滤器进无菌空气，开排气阀，关闭罐顶的所有阀门，开冷却水对发酵罐进行降温，待温度冷至35℃左右进行接种。