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发酵罐接种前准备将温度降至25℃以下
发酵罐接种前准备将温度降至25℃以下的发酵罐移至接种室,接通进气管道,先调整进气压力为0.06Mpa,开启进气阀门后打开发酵罐排气阀,保持罐内正压;将接种工具和摇瓶检测用试管放在层流罩下一侧平台架上;环境检测用平板放在检测专用平台上;将准备好的灭火用水、湿毛巾、酒精放入接种室的回风区;关闭接种室门,开启层流罩开关和紫光灯开关,30min后关闭紫光灯后开始接种。摇瓶使用前挑选:摇瓶摇瓶在使用前由技术部挑选是否为合格菌种,并将所用摇瓶菌丝状态填写在《摇瓶接种及使用记录》上。需放在磁力搅拌器上搅拌10分钟,待菌球打碎均匀后,方可接种,品保部每瓶进行复核。
1.接种接种人员带接种用手套,使用75%酒精+新洁尔灭溶液手部喷雾消毒;将准备好的摇瓶使用75%酒精+新洁尔灭溶液表面喷雾消毒,经接种孔,放入层流罩内待接发酵罐上;在检测专用架上打开环境检测平板;除去安全阀上的保险丝,将95%的酒精棉均匀放入发酵罐接种口下的凹槽中,用火焰喷枪引燃;充分灼烧发酵罐的盖面部分,并将灼烧后的接种工具并放于盖面上;用火焰喷枪对待用接种摇瓶瓶口及瓶口以下10cm范围灼烧消毒,灼烧棉塞,灼烧过程中旋转摇瓶,使其灼烧均匀充分;调整进气阀压力为0.00Mpa,待排气口出气微弱后,用工具打开接种口的保护阀,迅速调整进气阀压力为0.06Mpa,用接种工具挑起接种口罐盖,并放于发酵罐盖面火焰附近。
2.在喷枪的火焰保护下,用坩埚钳拔去摇瓶棉塞扔至灭火水桶内,并在火焰保护下迅速将摇瓶菌种倾倒入发酵罐,留20-30ml样品检测PH值备用;挑取发酵罐盖盖于接种口上,使用工具锁紧保护;摇瓶检测将灼烧后的接种钩放于摇瓶内;手持检测用试管,在酒精火焰上对试管口进行灼烧,待试管口内壁干燥后,保持试管口在火焰上方,另一只手指缝拔取棉塞,用接种钩蘸取少量样品,在试管斜面培养基上划线,并迅速塞上棉塞。
3.收取沉降菌检测平板,两天后由品保部记录结果;用湿毛巾熄灭凹槽内的火焰;关闭发酵罐出气阀门,待罐压回升至0.0阀,通气培养;填写《发酵罐状态卡》并悬挂于发酵罐上。接种结束关闭接种室层流罩电源开关;对摇瓶余留样液进行PH值检测,并填写《摇瓶接种及使用记录》,品保部签字确认;填写《发酵罐接种记录表》,品保部复核。清洁和整理接种室,使用200ppmTCCA对接种室墙壁和地面拖洗消毒,并填写《发酵罐接种室清洁记录》;关闭接种室日光灯和接种室门;检查确认接种后的发酵罐管道连接和通气状况是否正常,发酵罐接种结束。