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发酵设备事直到溶氧稳定 。这时开始调整搅拌、通气、压力或氧气的补充。如果培养基的pH低于3.0，中性蛋白酶会被抑制。故如果有必要可设为3.0 保持4-5h 甘油补料阶段。 甲醇补料培养在甲醇补料前甘油都必须消耗干净。1.12mlPTM1基本盐类每升的100％的甲醇进行诱导。速率为3.6ml/h每升初试发酵液体积。

1.开始的2-3h内甲醇会在发酵液中累积，溶氧值会有变化。DO值不能维持在20％以上，停止流加甲醇，等到DO值稳定后继续以当前速率流加甲醇。增加搅拌、通气、压力或者氧气的补充来使DO维持在20％以上。DO值会一直变化。

2.当培养物完全适应利用甲醇 （2-4h ）并且甲醇成为其限制性生长因子后，将会有一个稳定的DO读数和一个较快的DO稳定时间点（通常不到1min）。在培养物适应甲醇后而将流加速率翻倍前在限制条件下保持这个较低的流加速率最少